VASCULARISATION DES HYDATHODES
Les hydathodes sont des structures principalement situées sur le bord du limbe foliaire de la plupart des plantes vasculaires. Ces structures constituent des sites de guttation, phénomène se manifestant, tôt le matin, par l’apparition de gouttelettes d’eau aux extrémités et aux bords des feuilles. Certains pathogènes vasculaires, comme les bactéries Xanthomonas, pénètrent par ces structures et infectent de la sorte le système vasculaire.
Observation
Une simple méthode de clarification des tissus permet de visualiser la forte densité d’éléments vasculaires présents au niveau de ces structures. Cette méthode consiste à plonger des feuilles entières (ou des fragments selon la taille des feuilles) dans une solution de chloral hydrate. La composition est la suivante : dans 7,6 ml d’eau distillée mettre 45 g de chloral hydrate et 9,3 ml d’une solution aqueuse de glycérol (60 %). Utiliser des récipients en verre. Le temps de séjour à 4°C est très variable selon le type de feuille. Cela peut prendre 1 à 2 jours comme plusieurs semaines. Il est conseillé de mettre plusieurs fragments et d’observer régulièrement le niveau de clarification.
Les objets clarifiés peuvent être très fragiles et doivent être manipulés en douceur. Ils sont montés dans la même solution entre lame et lamelle et observés en lumière transmise. De belles observations peuvent être faites en contraste interférentiel ou Nomarsky.
Cette méthode a été utilisée avec succès pour des feuilles d’Arabette (Arabidopsis thaliana, voir images dans Cerutti et al. Plant Physiol. 2017), et des feuilles de monocotylédones comme l’orge, le maïs. L’observation des éléments vasculaires est plus difficile avec des espèces comme le riz dont les feuilles sont terminées en pointe et très riches en silice. Cette méthode simple et peu coûteuse a l’inconvénient majeur de ne pas préserver la fluorescence des tissus ou la fluorescence de protéines comme la GFP. Il est cependant possible d’introduire des fluorophores comme le calcofluor pour faire des observations en microscopie confocale.
Auteur
Plateforme de microscopie de la fédération de Recherches Agro Biosciences Interactions Biodiversité et LIPM (Laurent Noel)
Références
- Pour les aspects méthodologiques : voir sur le site de Bio-Protocol : Aude Cerutti, Marie-Christine Auriac, Laurent D. Noël and Alain Jauneau : Histochemical Preparations to Depict the Structure of Cauliflower Leaf Hydathodes bio-protocol 7(20): e2452. DOI: 10.21769/BioProtoc.2452.
- Pour la structure des hydathodes : Cerutti A et al. (2019) Mangroves in the Leaves: Anatomy, Physiology, and Immunity of Epithemal Hydathodes. Annu Rev Phytopathol.
Pour l’infection des feuilles de chou : Cerutti, A., Jauneau, A., Auriac, M. C., Lauber, E., Martinez, Y., Chiarenza, S., Leonhardt, N., Berthomé, R. and Noël, L. D. (2017). Immunity at Cauliflower Hydathodes Controls Systemic Infection by Xanthomonas campestris pv campestris. Plant Physiol 174(2): 700-716. - Pour l’infection des feuilles de chou : Cerutti, A., Jauneau, A., Auriac, M. C., Lauber, E., Martinez, Y., Chiarenza, S., Leonhardt, N., Berthomé, R. and Noël, L. D. (2017). Immunity at Cauliflower Hydathodes Controls Systemic Infection by Xanthomonas campestris pv campestris. Plant Physiol 174(2): 700-716.
