Title Image

COLORATION DES LIGNINES – REACTION DE MAÜLE

OBJECTIF

Visualisation des lignines sur des coupes de matériel végétal. Observation en microscopie optique

 

RÉACTIFS

  • Permanganate de potassium, KMnO4. M = 158.03
  • HCl 37% (~12N)
  • Sodium hydrogénocarbonate (bicarbonate de sodium) NaHCO3 M = 84.01

PRÉPARATION DES SOLUTIONS

  • Solution aqueuse de permanganate de potassium, 1% (Préparer une solution fraiche, cette solution étant instable).
  • Diluer au ½ l’HCl
  • Solution aqueuse de bicarbonate, 5%.

PROTOCOLE

  1. Incubation des coupes ou du matériel végétal 5-10 min (20min) dans la solution de permanganate 1%.
  2. Rinçages dans l’eau distillée 5 minutes (rinçages abondants).
  3. Décoloration pendant 1-3 min (5 min) des coupes dans HCl 6N.
  4. Rinçages 10 min dans l’eau distillée.
  5. Révélation et montage dans la solution de bicarbonate NaHCO3, 5%.

Si les tissus présentent une mauvaise conservation, diminuer la concentration d’HCl. (certains protocoles préconisent de l’HCl 3%, les temps de décoloration sont alors à augmenter). Les différents temps de traitement peuvent être à adapter selon le matériel biologique.

INTERPRÉTATION

Cette réaction permet de bien visualiser les parois lignifiées. Elle conduit à une coloration rouge ou brune selon la nature des sous unités composant les lignines. Les unités S (Syringyl) sont colorées en rouge, les unités G (Guaiacyl) en brun.

 

La coloration ne marche pas sur matériel enrésiné

RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES :

  • In Plant histochemistry and virology technics, III. Identification of Plant Constituent.
  • M. Locquin et M. Langeron (1978) Manuel de microscopie Eds Masson.
  • N Chaffey (2002) Wood Microscopical techniques.

Exemple d’image

 

Des coupes transversales de hampe florale d’Arabidopsis thaliana ont été faites à main levée. Le traitement au permanganate est effectué durant 15 min. Les coupes sont rincées à l’eau pendant minimum 5 min. La décoloration est faite 5 min dans HCl 6N, puis un lavage de 10 min dans l’eau. Le montage est dans le carbonate avec un temps min de révélation de 5 min. On distingue bien les différences de coloration selon les types cellulaires.

 

Il est possible de différencier dans le systéme HSI (Hue Saturation Intensity), par exemple,  les différentes teintes et donc de quantifier les surfaces de parois selon leur réactivité.

Auteur

Plateforme de microscopie de la fédération de Recherches Agro Biosciences Interactions Biodiversité.

Contact