OBSERVATION IN VIVO DE BIOFILMS A LA SURFACE DE FEUILLES DE POSIDONIES

Observer in vivo des biofilms sans en altérer la structure 3D.

L’exemple porte sur la visualisation de biofilms à la surface de feuille d’une plante marine, la posidonie (Posidonia oceanica). Les herbiers formés par cette plante peuvent être très étendus et ont un rôle capital dans l’équilibre de l’écosystème marin méditerranéen. Les échantillons ont été fournis dans de l’eau de mer par l’Observatoire de Banyuls.

Observation en microscopie confocale

En microscopie confocale, ces ornementations ont été observées à partir de culture de cellules différenciées en éléments vasculaires. Les observations sont facilitées par la présence d’une forte autofluorescence (excitation dans le proche UV 405 nm et/ou à 488 nm) associée à ces ornementations.

Vue à faible grossissement d’un biofilm à l’extrémité (bord du limbe) d’une feuille de Posidonie. Observation in vivo en microscopie confocale à balayage laser. Le limbe est délimité par un épiderme dont les cellules sont orientées perpendiculairement à la surface et bordées par une paroi externe émettant une fluorescence bleu clair. Les cellules corticales ont des parois visibles en bleu foncé.  Le limbe est entouré d’un biofilm d’épaisseur variable.

Les observations sont faites avec trois raies de longueur d’onde à l’excitation : une à 405 nm, la raie à 488 nm d’un laser argon et la raie à 633 nm d’un laser hélium néon. Trois fenêtres spectrales sont définies entre 410-470 nm, 500-580 nm et 650-750 nm et permettent de collecter la fluorescence à l’émission.